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人外周血白細胞分離液實驗方法WBC1077k
 
（細胞培養(yǎng)及分子生物學）
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：
 
情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：
 
1.       取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液
 
2.       用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：如改
變血液樣本及分離液用量，需相應調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸
 
索，以達到分離效果。）
 
3.       離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn) 品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重復洗滌 2-3 次，即得所需白細 胞。
 
4.       如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體操
 
作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
 
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：
 
1.       取一支適當?shù)碾x心管，先加入與樣本等量的分離液。
 
2.       將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心 時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果。加入血液樣本后，樣 本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。
 
3.       剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。
 
【注意事項】
 
1.    全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得的實驗結果，zui 好在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后 分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
2.    本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面，影響細胞分離效果。
 
3.    分離液用量大于稀釋后血液樣本時，分離效果更佳。
 
4.    當血液樣本粘度過高需稀釋時，*稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號： 2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚浴Ｈ缪簶?本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
 
5.    如實驗后細胞得率或活性過低，請以尋求幫助，具體詳 見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
 
【儲存條件及有效期】
 
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
 

 
【相關實驗技術方案】
 
1.       所獲得白細胞的培養(yǎng)技術。
 
2.       所獲得白細胞的核酸提取技術。
 
3.       所獲得白細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術 B.免疫組化技術 C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術
 
注：上述技術方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
 
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊”，并在說明書項目欄下下載使用。
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1.    由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 

 
2.       本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離 心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
 
3.       本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可 能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到分離效果，
離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。